Процедура иммуноферментного анализа

25 июня 2015
Иммуноферментный анализ основан на реакции образования иммунного комплекса антиген-антитело. Он состоит из 2 отдельных реакций: иммунной и ферментной. Иммунная реакция позволяет выявить предмет поиска (антиген), а ферментная реакция помогает определить концентрацию его. Исследование проводится с помощью иммуноферментного анализатора.
Иммуноферментный анализ имеет уникальную точность, приближающуюся к 100%.
Существует 2 способа проведения иммуноферментного анализа – прямой и непрямой. В прямом анализе антиген обнаруживают при помощи антител с меткой.
Этапы проведения прямого анализа:
- Исследуемый материал (кровь, спинномозговая жидкость и т.д.) помещается в лунки специального планшета и оставляют на полчаса для прикрепления антигенов к лункам.
- В лунки добавляют специфические антитела с метками и оставляют на 5 ч. для образования комплексов антиген-антитело. Чем большее число антигенов, тем больше комплексов получится.
- Удаляют путем вымывания избыточные, не связанные антитела. В лунке остаются лишь антитела в комплексе с антигенами.
- Добавляют в лунки специфичный для метки на антителах фермент. Он вызывает окрашивание соединений антиген-антитело.
- С помощью колориметра измеряют насыщенность окраски, что соответствует количеству связанных антител и подтверждает наличие и количественное содержание антигена.
Но более чувствительным и точным является непрямой метод, поэтому он применяется чаще. Точность метода обеспечивает двойной контроль над антигеном, так как антитела вносятся (и вымываются избыточные) дважды: вначале без меток, а затем с метками.
Он тоже проводится в несколько этапов:
- Исследуемый материал также вносится в лунку, где он связывается с антителами без меток.
- «Лишние» антитела без меток удаляют путем вымывания.
- В лунку вносят меченые антитела. В результате взаимодействия образуются комплексы немеченое антитело- антиген-меченое антитело.
- Вымывают не связанные антитела с метками.
- Вносят в лунки фермент (авидин или пероксидазу), который взаимодействует с метками и дает окрашивание.
- Измеряя интенсивность окрашивания, определяют наличие антител, а, значит, и концентрацию антигенов.
Важной характеристикой ИФА является его универсальность.
Иммуноферментная диагностика применяется для диагностики инфекций и аутоиммунных процессов, выявления маркеров сердечной патологии и онкомаркеров. Вместе с совершенствованием аппаратуры расширяются и показания для ее использования.
Что еще можно почитать
Перечень оснащения эндоскопического отделения по пр. МЗ РФ от 1.12.2005 г. № 753Стандарт оснащения оториноларингологического кабинета по пр. МЗ РФ от 12.11.2012 г. № 905н
Офтальмология
Разновидности шприцов
Диагностика псориаза
МРТ органов брюшной полости и забрюшинного пространства
Стоматит
Веки
В чем разница между низкопольными и высокопольными томографами?
Способы дозирования в медицине и гомеопатии