Процедура иммуноферментного анализа

25 июня 2015

Иммуноферментный анализ основан на реакции образования иммунного комплекса антиген-антитело. Он состоит из 2 отдельных реакций: иммунной и ферментной.  Иммунная реакция позволяет выявить предмет поиска (антиген), а ферментная реакция помогает определить концентрацию его.  Исследование проводится с помощью иммуноферментного анализатора.
   
Иммуноферментный анализ имеет уникальную точность, приближающуюся к 100%.
   
Существует 2 способа проведения иммуноферментного анализа – прямой и непрямой.  В прямом анализе антиген обнаруживают при помощи антител с меткой.
   
Этапы проведения прямого анализа:
  • Исследуемый материал (кровь, спинномозговая жидкость и т.д.) помещается в лунки специального планшета и оставляют на полчаса для прикрепления антигенов к лункам.
  • В лунки добавляют специфические антитела с метками и оставляют на 5 ч. для образования комплексов антиген-антитело. Чем большее число антигенов, тем больше комплексов получится.
  • Удаляют путем вымывания избыточные, не связанные антитела. В лунке остаются лишь антитела в комплексе с антигенами.
  • Добавляют в лунки специфичный для метки на антителах фермент.  Он вызывает окрашивание соединений антиген-антитело.
  • С помощью колориметра измеряют насыщенность окраски, что соответствует количеству связанных антител и подтверждает наличие и количественное содержание антигена.
   
Но более чувствительным и точным является непрямой метод, поэтому он применяется чаще.  Точность метода обеспечивает двойной контроль над антигеном, так как антитела вносятся (и вымываются избыточные) дважды: вначале без меток, а затем с метками.
   
Он тоже проводится в несколько этапов:
  • Исследуемый материал также вносится в лунку, где он связывается с антителами без меток.
  • «Лишние» антитела без меток удаляют путем вымывания.
  • В лунку вносят меченые антитела. В результате взаимодействия образуются комплексы немеченое антитело- антиген-меченое антитело.
  • Вымывают не связанные антитела с метками.
  • Вносят в лунки фермент (авидин или пероксидазу), который взаимодействует с метками и дает окрашивание.
  • Измеряя интенсивность окрашивания, определяют наличие антител, а, значит, и концентрацию антигенов.
   
Важной характеристикой ИФА является его универсальность.
   
Иммуноферментная диагностика применяется для диагностики инфекций и аутоиммунных процессов, выявления маркеров сердечной патологии и онкомаркеров. Вместе с совершенствованием аппаратуры расширяются и показания для ее использования.

все статьи